رساله دکتری نقشه یابی فیزیکی مقایسه ای ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 …
۱-۲-۷-۱ تاریخچه. ۱۱
۱-۲-۷-۲ اصول بنیادی.. ۱۲
۱-۲-۸ تکنیک های باندینگ (رنگ آمیزی) کروموزوم ها ۱۲
۱-۲-۸-۱ تاریخچه. ۱۲
۱-۲-۸-۲ اصول پایه ای.. ۱۳
۱-۲-۹- هیبریداسیون در محل فلورسنتی (FISH) 15
۱-۲-۹-۱ تاریخچه. ۱۵
۱-۲-۹-۲ اصول بنیادی.. ۱۵
۱-۲-۹-۳ استفاده از FISH در پژوهش های ستوژنتیک حیوانات اهلی.. ۱۶
۱-۲-۹-۴ استفاده از مکان یابی فیزیکی ژن ها با تکنیک FISH برای تایید صحت گردآوری های ژنوم موجودات.. ۱۷
| برای دانلود متن کامل این پایان نامه به سایت fumi.ir مراجعه نمایید. |
۱-۲-۹-۵ استفاده از مکان یابی فیزیکی ژن ها با تکنیک FISH برای اتصال نقشه های لینکاژی و RH روی کروموزوم ها ۱۹
۱-۲-۹-۶ استفاده از مکان یابی فیزیکی ژن ها با تکنیک FISH در رهیافت کلونینگ موقعیتی ژن ها و QTLها ۲۰
۱-۲-۱۰ انواع پروب های کلون DNA ژنومی استفاده شده در FISH.. 21
۱-۲-۱۱ ایمونوفلوروسنس… ۲۱
۱-۲-۱۲ ویژگی های متافاز ها و نقشه های سیتوژنتیک خانواده گاو سانان. ۲۲
۱-۲-۱۲-۱ آتوزوم ها و نقشه های سیتوژنتیک… ۲۲
۱-۲-۱۲-۲ کروموزوم های جنسی.. ۲۶
۱-۲-۱۳ بررسی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9. 27
۱-۲-۱۳-۱ ژن برولا (FecB) 27
۱-۲-۱۳-۲ ژن GDF9 (FecGH) 28
۱-۲-۱۳-۳ ژن BMP15 (FecX) 29
۱-۲-۱۳-۴ اثر متقابل بین جهش های موثر بر باروری.. ۳۰
فصل دوم. ۳۲
بررسی منابع. ۳۲
۲-۱ سابقه مطالعات سیتوژنتیک و نقشه یابی ژن ها با تکنیک FISH در حیوانات مزرعه ای.. ۳۳
۲-۲ سابقه مطالعه ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در حیوانات مزرعه ای.. ۳۷
فصل سوم. ۴۰
مواد و روش ها ۴۰
۳- مواد و روش ها ۴۱
۳ – ۱ تهیه نمونه های خون و کشت سلول های خونی.. ۴۱
۳ – ۱- ۱ تهیه ی نمونه های خون. ۴۱
۳ – ۱- ۲ کشت سلول های خونی با روش RB و انتخاب اسلاید های مناسب برای FISH.. 41
۳-۲ انتخاب و سفارش کلون های BAC.. 42
۳-۲-۱ شناسایی کلون های BAC حاوی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9. 44
۳-۲-۱-۱ ژن BMPR1B.. 45
۳-۲-۱-۲ ژن BMP15. 46
۳-۲-۱-۳ ژن GDF9. 47
۳-۳ کشت باکتری های حاوی کلون های BAC و استخراج DNA.. 48
۳-۴ نشاندارسازی DNA استخراج شده از کلون های BAC.. 51
۳-۵ تهیه کاریوتایپ گاو، گاومیش رودخانه ای، گوسفند و بز. ۵۱
۳-۶ هیبریداسیون در محل فلورسنتی (FISH) 51
۳-۷ مراحل بعد از FISH.. 52
۳-۷-۱ آشکار سازی سیگنال های FITC.. 53
۳-۷-۲ RBPI- باندینگ… ۵۳
۳-۸ بررسی میکروسکوپی اسلایدها و ردیابی سیگنال های FITC.. 53
۳-۹ تعیین محل دقیق (باند کروموزومی) ژن های مورد مطالعه روی کروموزوم ها ۵۴
فصل چهارم. ۵۵
نتایج.. ۵۵
۴- نتایج.. ۵۶
۴-۱ کیفیت DNA استخراج شده از کلون های BAC.. 56
۴-۲ نتایج حاصل از کشت سلولی و کاریوتایپ های تهیه شده برای گاو، گاو میش رودخانه ای، گوسفند و بز با روش RBA- باندینگ ۵۶
۴-۲-۱ کاریوتایپ RBA- باندینگ گاو (BTA) 56
۴-۲-۲ کاریوتایپ RBA- باندینگ گاو میش رودخانه ای (BBU) 56
۴-۲-۳ کاریوتایپ RBA- باندینگ گوسفند (OAR) 56
۴-۲-۴ کاریوتایپ RBA- باندینگ بز (CHI) 57
۴-۳ جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 با استفاده از تکنیک FISH روی کروموزوم های RBPI- باندینگ گونه های مورد مطالعه. ۵۷
۴-۳-۱ جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در گاو (BTA) 57
۴-۳-۲ جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در گاو میش رودخانه ای (BBU) 57
۴-۳-۳ جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در گوسفند (OAR) 57
۴-۳-۴ جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در بز (CHI) 58
۴-۴ مقایسه جایگاه فیزیکی ژن های BMPR1B، BMP15 و GDF9 در گاو، گاو میش رودخانه ای، گوسفند و بز با انسان. ۵۸
فصل پنجم. ۹۶
بحث و نتیجه گیری.. ۹۶
۵- بحث.. ۹۷
۵-۱ نقشه های ژنتیکی.. ۹۷
۵-۲ تفاوت های نقشه های فیزیکی و لینکاژی.. ۹۸
۵-۳ ژنومیکس مقایسه ای.. ۹۹
۵-۴ نتیجه گیری نهایی.. ۱۰۳
۵-۵ پیشنهادات.. ۱۰۳
واژه نامه. ۱۰۴
منابع و مآخذ. ۱۰۶
Abstract 121
فهرست جداول
جدول ۳-۱٫ مواد استفاده شده در کشت سلول های لنفوسیت خون در پژوهش حاضر. ۴۳
جدول ۳-۲٫ مشخصات کتابخانه BAC ژنوم گاوی موسسه INRA فرانسه. ۴۴
جدول ۳-۳٫ مشخصات کامل کلون های BAC استفاده شده در پژوهش حاضر.۴۴
جدول ۳-۴٫ ترکیبات محلول های P1، P2 و P3 استفاده شده در استخراج DNA.. 50
جدول ۴-۱٫ جایگاه های ژنی نقشه یابی شده، کلون های BAC شناسایی شده
فهرست شکل ها
شکل ۲-۱٫ مقایسه ایمونوفلوروسنس مستقیم و غیر مستقیم. ۲۲
شکل ۳-۱٫ اطلاعات کلون BtINRA-152G11استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن BMPR1B.. 45
شکل ۳-۲٫ اطلاعات کلون BtINRA-745D07 استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن BMPR1B. 46
شکل ۳-۳٫ اطلاعات کلون BtINRA-320H10 استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن BMP15. 47
شکل ۳-۴٫ اطلاعات کلون BtINRA-748C10 استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن BMP15. 48
شکل ۳-۵٫ اطلاعات کلون BtINRA-544F11 استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن GDF9. 49
شکل ۳-۶٫ اطلاعات کلون BtINRA-444D9 استفاده شده به عنوان پروب در مکان یابی ژن GDF9. 50
شکل ۳-۷٫ مراحل نشاندار سازی DNA با روش Nick Translation. 52
شکل ۴-۱٫ نتایج حاصل از استخراج DNA از کلون های BAC استفاده شده در پژوهش حاضر. ۶۰
شکل ۴-۲٫ کاریوتایپ RBA- باندینگ تهیه شده برای گاو (BTA) در پژوهش حاضر. ۶۱
شکل ۴-۳٫ آیدیوگرام های G- باندینگ (چپ) و R- باندینگ (راست) گاو ۶۲
شکل ۴-۴٫ کاریوتایپ RBA- باندینگ تهیه شده برای گاومیش رودخانه ای (BBU) در پژوهش حاضر. ۶۳
شکل ۴-۵٫ آیدیوگرام های G- باندینگ (چپ) و R- باندینگ (راست) گاو میش رودخانه ای.. ۶۴
شکل ۴-۶٫ کاریوتایپ RBA- باندینگ تهیه شده برای گوسفند (OAR) در پژوهش حاضر. ۶۵
شکل ۴-۷٫ آیدیوگرام های G- باندینگ (چپ) و R- باندینگ (راست) گوسفند. ۶۶
شکل ۴-۸٫ کاریوتایپ RBA- باندینگ تهیه شده برای بز (CHI) در پژوهش حاضر. ۶۷
شکل ۴-۹٫ جزئیات سیگنال های مربوط به نقشه یابی فیزیکی ژن BMPR1B با استفاده از تکنیک FISH و کلون BAC روی کروموزوم های RBPI-باندینگ در گاو (BTA). 68
شکل ۴-۱۰٫ موقعیت دقیق کروموزومی ژن BMPR1B روی کروموزوم شماره ۶ گاو (BTA) 69
شکل ۴-۱۱٫ جزئیات سیگنال های مربوط به نقشه یابی فیزیکی ژن BMP15 با استفاده از تکنیک FISH و کلون BAC روی کروموزوم های RBPI-باندینگ در گاو (BTA). 70
شکل ۴-۱۲٫ موقعیت دقیق کروموزومی ژن BMP15 روی کروموزوم X گاو (BTA) 71
شکل ۴-۱۳٫ جزئیات سیگنال های مربوط به نقشه یابی فیزیکی ژن GDF9 با استفاده از تکنیک FISH و کلون BAC روی کروموزوم های RBPI-باندینگ در گاو (BTA). 72
شکل ۴-۱۴٫ موقعیت دقیق کروموزومی ژن GDF9 روی کروموزوم شماره ۷ گاو (BTA) 73
شکل ۴-۱۵٫ جزئیات سیگنال های مربوط به نقشه یابی فیزیکی ژن BMPR1B با استفاده از تکنیک FISH و کلون BAC روی کروموزوم های RBPI-باندینگ در گاومیش رودخانه ای (BBU). 74
شکل ۴-۱۶٫ موقعیت دقیق کروموزومی ژن BMPR1B روی کروموزوم شماره ۷ گاو میش رودخانه ای (BBU) 75
